珈創(chuàng)生物 —— 生物技術(shù)服務(wù)與研發(fā)為一體的高新技術(shù)企業(yè)
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發(fā)布時間：2022-12-14 16:22 信息來源： 閱讀次數(shù)： 次
人間充質(zhì)干細胞（human mesenchymal stem cells, hMSCs）是一類存在于不同組織間質(zhì)或血管周圍、形態(tài)類似于成纖維細胞的成體干細胞，可在體外自我更新并具有成骨、成脂、成軟骨等分化能力。hMSCs具有獨特的、與治療疾病密切相關(guān)的生物學(xué)有效性(biological effectiveness)，因此已成為臨床研究中發(fā)展最為迅速的一類干細胞，具有廣泛的臨床應(yīng)用價值。
hMSCs質(zhì)量屬性
臨床應(yīng)用的hMSCs應(yīng)具有四類質(zhì)量屬性：基本細胞生物學(xué)屬性，微生物學(xué)安全性，生物學(xué)安全性和生物學(xué)有效性。其中生物學(xué)有效性與hMSCs臨床治療效應(yīng)密切相關(guān)，是臨床前研究階段用于預(yù)測臨床治療效應(yīng)，是現(xiàn)階段乃至未來決定hMSCs臨床轉(zhuǎn)化是否能成功的重要質(zhì)量屬性。不同組織來源的 hMSCs生物學(xué)有效性質(zhì)量屬性，可歸類為誘導(dǎo)分化功能、免疫調(diào)控能力及組織再生功能，而每一類別中又含有細化的內(nèi)容(或質(zhì)量屬性)。
體外評價hMSCs細胞向不同譜系的分化能力是hMSCs生物學(xué)有效性質(zhì)量評價的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，接下來就hMSCs的生物學(xué)有效性評價中的多向分化潛能作詳細介紹。
hMSCs多向分化潛能及其檢測方法
hMSCs在特定體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)條件下，具有向內(nèi)、中、外胚層不同細胞系分化的潛能。在體外質(zhì)量評價實驗中，可以通過特定的誘導(dǎo)條件將hMSCs向特定功能細胞分化，進而運用不同檢測技術(shù)對分化細胞的相關(guān)生物學(xué)特性或功能進行評價。目前普遍接受由ISCT于2006年首次提出的以成骨、成脂、成軟骨細胞誘導(dǎo)分化能力的評價方法。
一、 hMSCs成骨細胞誘導(dǎo)分化：
在體外培養(yǎng)條件下，經(jīng)過特定誘導(dǎo)條件使hMSCs分化發(fā)育為成骨細胞。通常將這個分化過程劃分為細胞增殖期、分化早期、分化中晚期三個階段。hMSCs 在貼壁后就開始進入細胞增殖階段，以DNA復(fù)制和組蛋白合成為特征。分化早期則以堿性磷酸酶活性升高、I型膠原分泌為特征，同時還伴有細胞增殖抑制。分化中晚期主要以鈣離子的沉積為特征。故常通過檢測鈣離子沉淀“鈣結(jié)節(jié)”的量來表示成骨分化的強弱。
茜素紅S是橙黃色的針狀體，由茜素經(jīng)發(fā)煙硫酸磺化，然后轉(zhuǎn)變?yōu)殁c鹽制得。屬一種蒽醌(Anthraquinone)類的衍生物，是茜素磺酸鈉鹽，它能與鈣鹽以鰲和方式形成橘紅色復(fù)合物，用以識別組織細胞的鈣鹽成分。經(jīng)茜素紅(alizarin red)染色呈陽性，提示成骨誘導(dǎo)分化后細胞內(nèi)可形成礦化基質(zhì)。
二、 hMSCs成脂細胞誘導(dǎo)分化：
人和哺乳動物體內(nèi)的脂肪組織可以分為白色脂肪組織和棕色脂肪組織，兩種脂肪組織的細胞中均含有脂肪，但是他們在分布位置和結(jié)構(gòu)功能上有所區(qū)別。白色脂肪組織普遍分布在皮下組織和內(nèi)臟周圍，主要起能量倉庫的作用，將多余的能量以脂肪的形式儲存起來。棕色脂肪組織主要分布在頸部兩側(cè)、背部上側(cè)、鎖骨附近和脊柱周圍，其細胞內(nèi)含有大量線粒體，可以將食物中的能量轉(zhuǎn)化為熱能。
hMSCs在相關(guān)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)14～28 d后，經(jīng)油紅O(oil red 0)染色為陽性，根據(jù)脂肪組織細胞的特點：細胞漿中含有脂肪滴，可以通過油紅O對細胞中脂肪滴染色。說明分化的細胞內(nèi)形成脂滴。
油紅O（蘇丹紅）是一種脂溶性偶氮染料，能特異性地使組織和細胞內(nèi)中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等染色。油紅 O 配成染色液用于染色時，可以通過相似相溶的原理使組織或細胞內(nèi)的脂滴著紅色，可用于分析組織或細胞樣本中的脂質(zhì)分布情況。
三、 hMSCs成軟骨細胞誘導(dǎo)分化：
具有成軟骨分化能力的hMSCs細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中，可以自發(fā)收縮聚集形成細胞微球，并逐漸形成具有一定硬度和彈性并呈白色外觀的軟骨樣子組織。該組織經(jīng)阿利新藍染色呈陽性。（在間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化為軟骨細胞后，細胞可以合成并分泌大量細胞外基質(zhì)，其中包括富含透明質(zhì)酸的糖胺聚糖，可以被阿利新藍染成藍色。）伴隨軟骨細胞分化，Ⅱ型膠原等軟骨細胞特定基因表達水平會顯著上調(diào)，因此可利用在軟骨分化條件下，hMSCs成細胞球能力、形成軟骨組織形態(tài)能力、番紅O或阿新藍染色及軟骨特定基因表達上調(diào)情況綜合判斷hMSCs成軟骨細胞分化能力。
這種基于三維細胞培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察和阿利新藍染色的檢測方法可以提供相對明確的成軟骨細胞分化能力的信息。
相關(guān)法規(guī)指導(dǎo)
后臺回復(fù)“干細胞質(zhì)量控制”，獲取相關(guān)指導(dǎo)文件。
武漢珈創(chuàng)生物相關(guān)服務(wù)
武漢珈創(chuàng)生物技術(shù)股份有限公司，創(chuàng)建于2011年，是一家集生物技術(shù)服務(wù)與研發(fā)為一體的高新技術(shù)企業(yè)，專注于為生物藥品/制品的生產(chǎn)企業(yè)及研發(fā)機構(gòu)提供各類細胞（含重組細胞、干細胞、免疫細胞等）及原輔料的質(zhì)量檢測、病毒清除工藝驗證技術(shù)服務(wù)。
質(zhì)量檢測服務(wù)
武漢珈創(chuàng)生物可按相關(guān)法規(guī)或者指導(dǎo)文件提供干細胞治療產(chǎn)品的各個生產(chǎn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量檢測服務(wù)，包括：
基本生物學(xué)屬性檢測
細胞鑒別、細胞活性檢測、種屬間細胞污染的檢測、染色體核型分析；
微生物學(xué)安全性檢測
無菌檢測、支原體檢測，確保產(chǎn)品無微生物污染或代謝產(chǎn)物污染；
生物學(xué)安全性檢測
成瘤性和致瘤性檢測、異常免疫反應(yīng)檢測、殘留物的檢測；
生物學(xué)有效性評價
多向分化功能的評價、免疫調(diào)控功能的評價、hMSCs組織再生功能的評價
干細胞放行快檢
珈創(chuàng)生物自主研發(fā)的放行快檢技術(shù)，可在6小時內(nèi)完成，涵蓋細菌、真菌和支原體快檢技術(shù)，且技術(shù)方法已成熟，經(jīng)過了上百次驗證。
定制化服務(wù)
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