珈創(chuàng)生物 —— 生物技術(shù)服務(wù)與研發(fā)為一體的高新技術(shù)企業(yè)
優(yōu)質(zhì)高效透明
High quality, efficient and transparent
細(xì)胞治療產(chǎn)品來(lái)源多樣、生物學(xué)特性復(fù)雜。間充質(zhì)干細(xì)胞、NK細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞、誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞等不同類(lèi)別細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程都會(huì)涉及細(xì)胞的離體培養(yǎng)。而細(xì)胞離體培養(yǎng)必然會(huì)涉及生物學(xué)屬性的變化、生物學(xué)安全性改變、外源性污染、交叉污染等問(wèn)題，這些問(wèn)題嚴(yán)重影響研發(fā)初始到生產(chǎn)過(guò)程的進(jìn)展和成功。
根據(jù)《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》、《人源性干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》、《基因修飾細(xì)胞治療產(chǎn)品非臨床研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》等指南要求，研究者需建立各類(lèi)細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制策略。質(zhì)量控制一般應(yīng)考慮鑒別、生物學(xué)效力、純度、雜質(zhì)、細(xì)胞數(shù)量（活細(xì)胞數(shù)、功能細(xì)胞數(shù)等）和一般安全性檢測(cè)（如無(wú)菌、支原體、內(nèi)毒素、外觀、除細(xì)胞數(shù)之外的其他外源性異物等）等。同時(shí)也要根據(jù)細(xì)胞治療產(chǎn)品特性，質(zhì)量研究和檢查應(yīng)涵蓋細(xì)胞特性分析、特定病毒和非特定病毒檢測(cè)、病毒載體回復(fù)突變（復(fù)制性病毒檢測(cè)）、生物學(xué)活性（明確產(chǎn)品與臨床治療相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)和作用機(jī)制）等。
珈創(chuàng)生物可提供細(xì)胞基因療法（CGT）產(chǎn)品的綜合質(zhì)量檢測(cè)服務(wù)。
針對(duì)如間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)品這類(lèi)非基因編輯細(xì)胞治療產(chǎn)品，珈創(chuàng)生物可提供：
1、微生物學(xué)安全性檢測(cè)，建立從原輔料、起始原物料（如生產(chǎn)用細(xì)胞、菌毒種等）到產(chǎn)品的各方面質(zhì)量安全控制方案，確保各類(lèi)細(xì)胞及細(xì)胞產(chǎn)品滿足無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體、病毒污染，以及無(wú)微生物代謝產(chǎn)物污染的質(zhì)量要求；
2、生物學(xué)安全性檢測(cè)，建立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)或排除細(xì)胞治療產(chǎn)品進(jìn)入人體后產(chǎn)生成瘤性、異常免疫反應(yīng)、分化等安全性問(wèn)題；
3、生物學(xué)屬性檢測(cè)，如細(xì)胞鑒別、活性、純度和均一性等生物學(xué)屬性評(píng)價(jià)，降低各類(lèi)細(xì)胞治療產(chǎn)品因其本身具有的多樣性、異質(zhì)性、復(fù)雜性等特點(diǎn)帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)；
4、生物學(xué)有效性檢測(cè)，如誘導(dǎo)分化能力、免疫學(xué)反應(yīng)、相關(guān)活性物質(zhì)分泌等來(lái)預(yù)測(cè)臨床治療效應(yīng)。
針對(duì)如CAR-T細(xì)胞這類(lèi)基因編輯的免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品，除上述一般性的細(xì)胞質(zhì)量控制檢項(xiàng)外，還需考慮生產(chǎn)質(zhì)粒的菌種，質(zhì)粒、慢病毒以及特殊生產(chǎn)工藝中引入的其他風(fēng)險(xiǎn)，如慢病毒載體回復(fù)突變（RCL檢測(cè)）、對(duì)靶細(xì)胞的效應(yīng)、分泌特定因子、工藝相關(guān)雜質(zhì)（磁珠等）和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如非功能雜細(xì)胞群等）檢測(cè)等。
珈創(chuàng)生物細(xì)胞治療產(chǎn)品技術(shù)服務(wù)檢測(cè)項(xiàng)目總表
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序號(hào) |
類(lèi)別(產(chǎn)品/項(xiàng)目/參數(shù)) |
產(chǎn)品/項(xiàng)目/參數(shù) |
依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)（方法）名稱及編號(hào)（含年號(hào)） |
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序號(hào) |
名 稱 |
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1 |
細(xì)胞鑒別試驗(yàn) |
1.1 |
同工酶試驗(yàn) |
生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程《中國(guó)藥典》2020年版三部， 生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制、 生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制、生物制品病毒安全性控制《中國(guó)藥典》2020年版三部 Code of Federal Regulation Title 9（9 CFR） Guidance for Industry :Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications |
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1.2 |
染色體核型分析法 |
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1.3 |
STR分析法 |
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1.4 |
細(xì)胞形態(tài)觀察法 |
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1.5 |
細(xì)胞表面標(biāo)記物檢測(cè)--流式細(xì)胞術(shù) |
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1.6 |
DNA條形碼法 |
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1.7 |
種屬鑒定-- PCR法 |
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1.8 |
RAPD法（隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA） |
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2 |
無(wú)菌檢查 |
2.1 |
細(xì)菌、真菌無(wú)菌檢查--薄膜過(guò)濾法 |
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2.2 |
細(xì)菌、真菌無(wú)菌檢查--直接接種法 |
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2.3 |
分枝桿菌檢查法 |
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3 |
支原體檢查 |
3.1 |
支原體檢查--瓊脂培養(yǎng)法 |
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3.2 |
支原體檢查--液體培養(yǎng)法 |
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3.3 |
支原體檢查--DNA染色法 |
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4 |
內(nèi)、外源病毒因子檢查 |
4.1 |
細(xì)胞形態(tài)觀察及血吸附試驗(yàn) |
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4.2 |
體外不同指示細(xì)胞接種培養(yǎng)法 |
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4.3 |
動(dòng)物體內(nèi)接種法 |
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4.3.1 |
乳鼠腦內(nèi)及腹腔接種法 |
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4.3.2 |
小鼠腦內(nèi)及腹腔接種法 |
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4.3.3 |
豚鼠腹腔接種法 |
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4.3.4 |
家兔皮內(nèi)及皮下接種法 |
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4.4 |
雞胚接種法 |
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4.4.1 |
雞胚卵黃囊接種法 |
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4.4.2 |
雞胚尿囊腔接種及尿囊液血凝試驗(yàn) |
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4.5.1 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)--逆轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法 |
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4.5.2 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)--透射電鏡觀察法 |
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4.5.3 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)--感染性試驗(yàn) |
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4.5.4 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒定量--透射電鏡法 |
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4.5.5 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒定量--Q-PCR法 |
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4.6.1 |
鼠源性病毒檢測(cè)--細(xì)胞試驗(yàn) |
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4.6.2 |
鼠源性病毒檢測(cè)--動(dòng)物抗體產(chǎn)生試驗(yàn) |
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4.6.3 |
鼠源性病毒檢測(cè)--雞胚感染試驗(yàn) |
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4.6.4 |
鼠源性病毒檢測(cè)--Q-PCR法 |
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4.7.1 |
人源病毒檢測(cè)--免疫熒光法 |
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4.7.2 |
人源病毒檢測(cè)--Q-PCR法 |
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4.8.1 |
牛源性病毒檢測(cè)--細(xì)胞培養(yǎng)法 |
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4.8.2 |
牛源性病毒檢測(cè)--熒光抗體檢測(cè)法 |
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4.8.3 |
牛源性病毒檢測(cè)--Q-PCR法 |
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4.9.1 |
鼠細(xì)小病毒檢測(cè)--細(xì)胞培養(yǎng)法 |
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4.9.2 |
鼠細(xì)小病毒檢測(cè)--Q-PCR法 |
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4.10.1 |
豬源性病毒檢測(cè)--細(xì)胞培養(yǎng)法 |
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4.10.2 |
豬源性病毒檢測(cè)--熒光抗體檢測(cè)法 |
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4.10.3 |
豬源性病毒檢測(cè)--Q- PCR法 |
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4.11.1 |
杯狀病毒（Vesivirus 2117）檢測(cè)--Q- PCR法 |
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5 |
成瘤性檢查 |
5.1 |
動(dòng)物體內(nèi)接種法 |
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5.2 |
軟瓊脂克隆形成試驗(yàn) |
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5.3 |
端粒酶活性檢測(cè)--Q-PCR法 |
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6 |
致瘤性檢查 |
6.1 |
動(dòng)物體內(nèi)接種法 |
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7 |
免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè) |
7.1 |
淋巴細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn) |
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7.2 |
特定淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)法（Th1,Th17,Treg） |
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7.3 |
淋巴細(xì)胞分泌TNF-α抑制試驗(yàn) |
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8 |
生物學(xué)有效性評(píng)價(jià) |
8.1 |
成骨細(xì)胞分化試驗(yàn) |
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8.2 |
成軟骨細(xì)胞分化試驗(yàn) |
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8.3 |
成脂細(xì)胞分化試驗(yàn) |
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9 |
細(xì)胞活性檢測(cè) |
9.1 |
細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞存活率檢測(cè)法 |
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9.2 |
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定法 |
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9.3 |
細(xì)胞周期測(cè)定--PI染色法 |
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10 |
殘留物檢測(cè) |
10.1 |
牛血清白蛋白殘留檢測(cè)法 |
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10.2 |
抗生素殘留檢測(cè)--培養(yǎng)法 |
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10.3 |
抗生素殘留檢測(cè)--酶聯(lián)免疫法 |
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10.4 |
磁珠殘留 |
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10.5 |
Human IL-2殘留 |
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11 |
噬菌體污染檢查 |
11.1 |
透射電鏡觀察--負(fù)染色法 |
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11.2 |
培養(yǎng)觀察--噬斑法 |
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12 |
菌種鑒定 |
12.1 |
菌株染色觀察--普通染色法 |
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12.2 |
菌株染色觀察--革蘭氏染色法 |
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12.3 |
菌落形態(tài)觀察-培養(yǎng)法 |
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12.4 |
菌株抗生素抗性試驗(yàn)-培養(yǎng)法 |
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12.5 |
菌株生化特征分析--生化反應(yīng)試驗(yàn) |
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12.6 |
16SrRNA分析法 |
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12.7 |
18SrRNA分析法 |
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12.8 |
26SrRNA分析法 |
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12.9 |
ITS序列分析法 |
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13 |
細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) |
13.1 |
凝膠法 |
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14 |
可復(fù)制型病毒檢測(cè) |
14.1 |
復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)--細(xì)胞培養(yǎng)和 Q- PCR法 |
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14.2 |
復(fù)制性慢病毒檢測(cè)--細(xì)胞培養(yǎng)和 Q- PCR/ELISA法 |
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15 |
細(xì)胞制劑檢測(cè) |
CAR+T細(xì)胞比例 CD3+細(xì)胞比例 生物學(xué)活性 磁珠殘留 Human IL-2殘留 NK細(xì)胞自然殺傷活性檢測(cè) NK細(xì)胞ADCC功能檢測(cè) NK激活性和抑制性受體檢測(cè)GzmB,perforin,CD107表達(dá)水平檢測(cè) |
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16 |
其他檢測(cè)項(xiàng)目 |
流式細(xì)胞術(shù)的絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)方法 CCK-8法則定細(xì)胞群體倍增時(shí)間 細(xì)胞克隆形成率檢測(cè)方法 MSC急性毒性及抗GVHD效果評(píng)價(jià) 基于RPA-cas技術(shù)的口腔支原體檢測(cè) 基于LAMP技術(shù)的肺炎支原體的可視化檢測(cè) Lb-cas12a蛋白的原核表達(dá)及純化 基于CRISPRCas系統(tǒng)的多種支原體核酸檢測(cè) mRNA含量ribogreen熒光檢測(cè) mRNA疫苗總抗體滴度ELISA檢測(cè)法 mRNA疫苗中和抗體效價(jià)假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)法 dsRNA雜質(zhì)ELISA檢測(cè)法 馬源性病毒檢查（3種） 禽源性病毒檢查（3種） 昆蟲(chóng)細(xì)胞CO1條形碼分析法 昆蟲(chóng)細(xì)胞螺原體qPCR檢測(cè) 昆蟲(chóng)桿狀病毒檢測(cè) 昆蟲(chóng)黃病毒檢測(cè) 昆蟲(chóng)諾達(dá)病毒檢測(cè) 昆蟲(chóng)彈狀病毒（內(nèi)源性/外源性）檢測(cè) SV40大T抗原核酸序列檢測(cè) 腺病毒5型EIA基因檢測(cè) 胎畸瘤形成試驗(yàn) |
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