免疫細(xì)胞療法廣泛應(yīng)用于臨床，尤其是惡性腫瘤，是指采集人體自身免疫細(xì)胞，經(jīng)過體外改造、培養(yǎng)，使其數(shù)量擴(kuò)增或增加其靶向殺傷能力，然后再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，達(dá)到殺滅血液及組織中病原體、腫瘤細(xì)胞的目的。
     CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)因其安全性和廣泛適用性，成為近年來一種發(fā)展較快的抗腫瘤治療技術(shù)，但實(shí)際應(yīng)用中，以逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒為載體的CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品，也仍然存在一定安全隱患，其主要原因在于，作為載體的逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒仍有可能產(chǎn)生具體有復(fù)制能力的病毒，即產(chǎn)生復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒（replication competent retroviruses，RCR）或產(chǎn)生復(fù)制性慢病毒（replication competent lentivirus, RCL）。

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體均為復(fù)制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過程中因穿梭載體、包裝載體及包裝細(xì)胞中的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄元件之間，或病毒載體與免疫細(xì)胞的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄元件之間發(fā)生同源或非同源重組，會導(dǎo)致可復(fù)制慢病毒(replication competent lentivirus，RCL)產(chǎn)生。鑒于RCL潛在的威脅，F(xiàn)DA及歐盟先后出臺了相關(guān)文件，要求在生產(chǎn)及應(yīng)用的不同階段進(jìn)行RCL的控制，包括生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫、終末細(xì)胞、病毒載體及轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞，并對CAR-T細(xì)胞回輸后的患者個(gè)體進(jìn)行監(jiān)測。

珈創(chuàng)生物構(gòu)建了HIV-1弱毒質(zhì)粒，包裝了HIV-1弱毒作為RCL實(shí)驗(yàn)的陽性對照病毒，并對陽性對照與抑制對照中HIV-1弱毒的添加量進(jìn)行摸索，使用合適添加量，以驗(yàn)證反應(yīng)體系的適用性，又能監(jiān)測反應(yīng)靈敏度。同時(shí)，對供試品（慢病毒終末細(xì)胞、慢病毒上清液、CAR-T轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞）添加量也進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以確保供試品不會明顯影響C8166敏感細(xì)胞的增殖和感染。供試品在C8166細(xì)胞中經(jīng)過擴(kuò)增階段和指示階段的培養(yǎng)后，感染終點(diǎn)的細(xì)胞上清將進(jìn)行p24 Elisa檢測；同時(shí)細(xì)胞將用來提取DNA，進(jìn)行psi-gag和VSV-G基因qPCR檢測（引物探針由本公司自行設(shè)計(jì)）。本公司建立的RCL檢測方法經(jīng)過方法驗(yàn)證，可滿足不同類型供試品的檢測需求。