珈創(chuàng)生物 —— 生物技術(shù)服務(wù)與研發(fā)為一體的高新技術(shù)企業(yè)
優(yōu)質(zhì)高效透明
High quality, efficient and transparent
1、服務(wù)信息（簡介）
珈創(chuàng)生物病毒清除工藝驗(yàn)證技術(shù)服務(wù)，為客戶提供定制的病毒清除工藝驗(yàn)證服務(wù)，通過 Q-PCR 或感染性實(shí)驗(yàn)對(duì)工藝處理前后樣品進(jìn)行病毒檢測(cè)和滴度分析，驗(yàn)證客戶下游工藝對(duì)病毒的去除/滅活效果。
珈創(chuàng)生物擁有經(jīng)過國家法檢認(rèn)定的 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室，珈創(chuàng)生物病毒清除工藝驗(yàn)證具備CMA及CNAS雙認(rèn)證；實(shí)驗(yàn)室配套多臺(tái)生物安全柜、AKTA 純化儀、納濾過濾設(shè)備、超速離心機(jī)等設(shè)備，可開展低 pH 孵育、熱處理/巴氏消毒、S/D 處理、柱層析（親和層析、陰離子交換層析和疏水層析等）和納米膜過濾等多種工藝的病毒清除工藝驗(yàn)證。行業(yè)經(jīng)驗(yàn)豐富，累計(jì)完成數(shù)百起病毒清除工藝驗(yàn)證項(xiàng)目。
珈創(chuàng)生物病毒清除工藝驗(yàn)證平臺(tái)團(tuán)隊(duì)負(fù)責(zé)人為武漢大學(xué)微生物學(xué)博士，具備豐富的病毒學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)基礎(chǔ)和科研經(jīng)歷，多年專注于細(xì)胞檢測(cè)和病毒清除工藝驗(yàn)證項(xiàng)目開展和優(yōu)化。專業(yè)團(tuán)隊(duì)擁有十年以上的從業(yè)經(jīng)驗(yàn)，通過不斷優(yōu)化技術(shù)體系，提高指示病毒滴度和純度以滿足法規(guī)和客戶的需求。團(tuán)隊(duì)核心成員具有扎實(shí)的生物醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等相關(guān)專業(yè)背景，具備5 年以上的病毒清除工藝驗(yàn)證從業(yè)經(jīng)驗(yàn)。
近年來，珈創(chuàng)生物已向國內(nèi)數(shù)百家生物藥企業(yè)提供國內(nèi)外病毒清除工藝驗(yàn)證技術(shù)服務(wù)，兼顧國內(nèi)與國外的法規(guī)要求差異，根據(jù)客戶需求，提供全面合理的驗(yàn)證方案，并提供權(quán)威的檢測(cè)報(bào)告，為企業(yè)在工藝開發(fā)、新藥臨床試驗(yàn)申報(bào)（IND）及生物制品許可申請(qǐng)（BLA）保駕護(hù)航，取得了良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
2、法規(guī)依據(jù)
《生物制品病毒安全性控制》中華人民共和國藥典，2020年版，三部，生物制品通則
《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》國藥監(jiān)注[2002]160號(hào)
《生物組織提取制品和真核細(xì)胞表達(dá)制品的病毒安全性評(píng)價(jià)技術(shù)審評(píng)一般原則》國家食品藥品監(jiān)督管理局編號(hào)：[S]GPH3-1，2005 年 12 月
《動(dòng)物源性醫(yī)療器械病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則》國家食品藥品監(jiān)督管理局關(guān)于發(fā)布動(dòng)物源性醫(yī)療器械注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則的通告（2017 年第 224 號(hào)）
Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived From Cell Lines of Human or Animal Origin. 1999. ICH Q5A（R1）
Design, Evaluation, and Characterization of Viral Clearance Procedure.2016. USP General Chapter: <1050.1>
3、 指示病毒選擇
指示病毒可分為“相關(guān)”病毒（如人血液制品可能攜帶的人類病毒 HAV、HBV、HIV 和 B19 等）、特異“模型”病毒（如 CHO 表達(dá)系統(tǒng)的 MVM、x-MuLV 病毒，桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的 BV 病毒等）和非特異“模型”病毒（如 CHO 表達(dá)系統(tǒng)的 PRV 和 Reo3 病毒）三類，應(yīng)優(yōu)先選擇與潛在污染病毒密切相關(guān)的病毒，如相關(guān)病毒不能獲取或不適于體外培養(yǎng)，可采用特異“模型”病毒代替。
評(píng)價(jià)病毒清除的總能力時(shí)，應(yīng)選擇具有不同特性的非特異性模型病毒，包括 DNA/RNA、有/無包膜、顆粒大小、尤其對(duì)物理/化學(xué)處理明顯耐受的病毒等指示病毒需有足夠高的滴度，同時(shí)所選指示病毒不能對(duì)操作人員和環(huán)境造成生物危害。
驗(yàn)證平臺(tái)擁有豐富的病毒毒種毒株，且背景清楚，純度高，滴度可達(dá) 8~9Log10/ml。表 1 列出了 CHO 表達(dá)制品工藝驗(yàn)證最常用四種指示病毒：
表 1 病毒清除工藝驗(yàn)證中常用指示病毒性質(zhì)
| 病毒名稱 |
病毒特性 |
檢測(cè)方法 |
病毒滴度 Log10/ml |
|
Reo3（呼腸孤病毒） |
雙鏈 RNA 病毒，無包膜，抗性中50-70nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MVM（鼠細(xì)小病毒 ） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性極高
18-26nm
|
TCID50 Q-PCR |
8.5-9.5 |
| PRV(偽狂病毒) | 雙鏈 DNA 病毒有包膜，抗性中120-200nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MuLv （鼠白血病病毒） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 80-120nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
BV (桿狀病毒) |
雙鏈 DNA病毒有包膜 45×275nm |
TCID50 |
8-9 |
|
POL-1 (人脊髓灰質(zhì)炎I型病毒) |
單鏈 RNA 病毒無包膜，抗性中 25-30nm |
TCID50 |
8-9 |
|
VSV (水皰性口炎病毒) |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 70×150nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
PPV （豬細(xì)小病毒） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性高 18-24nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
HAdV-5
(人腺病毒5型) |
雙鏈 DNA 病毒無包膜，抗性低
70-90nm |
TCID50 |
8.5-9.5 |
|
BPIV-3 （牛副流感病毒3型） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 150-200nm |
TCID50 |
8-9 |
4、病毒清除工藝驗(yàn)證方案
2020 年 1 月 21 日，國家藥品監(jiān)督管理局（簡稱：NMPA）發(fā)布 “國家藥監(jiān)局關(guān)于適用《Q2（R1）：分析方法論證：正文和方法學(xué)》 等 11 個(gè)國際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)指導(dǎo)原則的公告（2020 年第 7 號(hào)）”。公告明確：本公告發(fā)布之日起 6 個(gè)月后（即：2020 年 7 月 10 日）開始的藥學(xué)研究（以試驗(yàn)記錄時(shí)間點(diǎn)為準(zhǔn)），適用 ICH 指導(dǎo)原則, 其 中包含了 ICH Q5A (R1)和 Q5B。因此，目前人用單抗、蛋白藥物等生物制品的病毒清除驗(yàn)證國內(nèi)外適用一套標(biāo)準(zhǔn)和原則，建議的驗(yàn)證方案 （CHO 表達(dá)系統(tǒng)）如下表所示：
表 2 目前建議的IND和BLA申報(bào)所需病毒清除工藝驗(yàn)證總體方案
|
工藝 |
臨床Ι期（IND）
NMPA/EMA/UDFDA
|
臨床Ⅲ期后報(bào)產(chǎn)（BLA）
NMPA/EMA/UDFDA
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低 pH 孵育或 S/D 處理 |
1種病毒（MuLV），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn) |
2 種病毒（MuLV，PRV），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn) |
|
納米膜過濾 |
2種病毒（MuLV，MVM），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn) |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn) |
|
陰離子交換層析 |
2種病毒（MuLV，MVM），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn) |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn)，需評(píng)估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
|
另外一種層析 |
可選 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復(fù)2次實(shí)驗(yàn)，需評(píng)估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
病毒清除工藝驗(yàn)證案例展示
珈創(chuàng)生物已為數(shù)百家國內(nèi)外生物企業(yè)提供專業(yè)，全面合理的病毒清除工藝驗(yàn)證服務(wù)；評(píng)審?fù)ㄟ^率為100%；有專業(yè)PM及時(shí)響應(yīng)客戶需求，跟蹤項(xiàng)目進(jìn)度，服務(wù)貫穿申報(bào)全程，提供合理化申報(bào)材料書寫建議等。
申報(bào)階段：IND
申報(bào)對(duì)象：國內(nèi)外雙申報(bào)
工藝及結(jié)果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數(shù)（log10） |
||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
|
|
低pH孵育 |
≥4.30±0.14 |
/ |
≥5.20±0.07 |
|
陰離子層析 |
≥5.05±0.00 |
≥5.9±0.35 |
/ |
|
納米膜過濾 |
≥4.85±0.07 |
≥5.15±0.07 |
/ |
申報(bào)階段：BLA
申報(bào)對(duì)象：國內(nèi)申報(bào)
工藝及結(jié)果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數(shù)（log10） |
||||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
Reo3 |
||
|
低pH孵育 |
≥5.80±0.28 |
/ |
≥5.15±0.07 |
/ |
|
|
納米膜過濾 |
≥4.95±0.00 |
≥4.55±0.00 |
≥4.30±0.14 |
≥4.15±0.07 |
|
|
親和層析 |
新填料 |
3.38±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.14 |
2.43±0.20 |
|
舊填料 |
3.48±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.51 |
2.29±0.16 |
|
|
陰離子層析 |
新填料 |
4.30±0.00 |
4.19±0.07 |
4.70±0.07 |
4.64±0.07 |
|
舊填料 |
4.35±0.00 |
4.33±0.10 |
4.66±0.29 |
4.50±0.14 |
|
