臨床應(yīng)用的hMSCs應(yīng)具有四類(lèi)質(zhì)量屬性：基本細(xì)胞生物學(xué)屬性，微生物學(xué)安全性，生物學(xué)安全性和生物學(xué)有效性。其中生物學(xué)有效性與hMSCs臨床治療效應(yīng)密切相關(guān)，是臨床前研究階段用于預(yù)測(cè)臨床治療效應(yīng)，是現(xiàn)階段乃至未來(lái)決定hMSCs臨床轉(zhuǎn)化是否能成功的重要質(zhì)量屬性。不同組織來(lái)源的 hMSCs生物學(xué)有效性質(zhì)量屬性，可歸類(lèi)為誘導(dǎo)分化功能、免疫調(diào)控能力及組織再生功能，而每一類(lèi)別中又含有細(xì)化的內(nèi)容(或質(zhì)量屬性)。

hMSCs在特定體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)條件下，具有向內(nèi)、中、外胚層不同細(xì)胞系分化的潛能。在體外質(zhì)量評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，可以通過(guò)特定的誘導(dǎo)條件將hMSCs向特定功能細(xì)胞分化，進(jìn)而運(yùn)用不同檢測(cè)技術(shù)對(duì)分化細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)特性或功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。目前普遍接受由ISCT于2006年首次提出的以成骨、成脂、成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化能力的評(píng)價(jià)方法。

一、 hMSCs成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化：

在體外培養(yǎng)條件下，經(jīng)過(guò)特定誘導(dǎo)條件使hMSCs分化發(fā)育為成骨細(xì)胞。通常將這個(gè)分化過(guò)程劃分為細(xì)胞增殖期、分化早期、分化中晚期三個(gè)階段。hMSCs 在貼壁后就開(kāi)始進(jìn)入細(xì)胞增殖階段，以DNA復(fù)制和組蛋白合成為特征。分化早期則以堿性磷酸酶活性升高、I型膠原分泌為特征，同時(shí)還伴有細(xì)胞增殖抑制。分化中晚期主要以鈣離子的沉積為特征。故常通過(guò)檢測(cè)鈣離子沉淀“鈣結(jié)節(jié)”的量來(lái)表示成骨分化的強(qiáng)弱。

茜素紅S是橙黃色的針狀體，由茜素經(jīng)發(fā)煙硫酸磺化，然后轉(zhuǎn)變?yōu)殁c鹽制得。屬一種蒽醌(Anthraquinone)類(lèi)的衍生物，是茜素磺酸鈉鹽，它能與鈣鹽以鰲和方式形成橘紅色復(fù)合物，用以識(shí)別組織細(xì)胞的鈣鹽成分。經(jīng)茜素紅(alizarin red)染色呈陽(yáng)性，提示成骨誘導(dǎo)分化后細(xì)胞內(nèi)可形成礦化基質(zhì)。

二、 hMSCs成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化：

人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂肪組織可以分為白色脂肪組織和棕色脂肪組織，兩種脂肪組織的細(xì)胞中均含有脂肪，但是他們?cè)诜植嘉恢煤徒Y(jié)構(gòu)功能上有所區(qū)別。白色脂肪組織普遍分布在皮下組織和內(nèi)臟周?chē)饕鹉芰總}(cāng)庫(kù)的作用，將多余的能量以脂肪的形式儲(chǔ)存起來(lái)。棕色脂肪組織主要分布在頸部?jī)蓚?cè)、背部上側(cè)、鎖骨附近和脊柱周?chē)浼?xì)胞內(nèi)含有大量線粒體，可以將食物中的能量轉(zhuǎn)化為熱能。

hMSCs在相關(guān)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)14～28 d后，經(jīng)油紅O(oil red 0)染色為陽(yáng)性，根據(jù)脂肪組織細(xì)胞的特點(diǎn)：細(xì)胞漿中含有脂肪滴，可以通過(guò)油紅O對(duì)細(xì)胞中脂肪滴染色。說(shuō)明分化的細(xì)胞內(nèi)形成脂滴。

油紅O（蘇丹紅）是一種脂溶性偶氮染料，能特異性地使組織和細(xì)胞內(nèi)中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等染色。油紅 O 配成染色液用于染色時(shí)，可以通過(guò)相似相溶的原理使組織或細(xì)胞內(nèi)的脂滴著紅色，可用于分析組織或細(xì)胞樣本中的脂質(zhì)分布情況。

武漢珈創(chuàng)生物相關(guān)服務(wù)

基本生物學(xué)屬性檢測(cè)

微生物學(xué)安全性檢測(cè)

生物學(xué)安全性檢測(cè)

生物學(xué)有效性評(píng)價(jià)